实时荧光定量PCR是以DNA或者cDNA为模板进行扩增、并加入荧光基团进行定量,用于检测DNA或者RNA含量,可研究某个基因在经过特定处理后转录水平的变化情况。qPCR在基因表达研究和临床疾病检测等领域已得到广泛应用,如转基因动植物检测、病原微生物或病毒含量检测、癌症检测以及药物反应个体差异的遗传基础检测、基因差异表达和基因分型等。实时荧光定量常用的方法有SYBR Green I法和Tag Man探针法,目前绝大多数出于实验需要和成本的原因会优先考虑染料法。
送样须知
1.寄送样本可以为细胞、细菌、真菌、动植物组织等。为了保证提取的遗传物质足够,样品数尽可能准备充足。
2.样品为纯细胞或细菌样,离心后获得沉淀黄豆大小为宜,若样品为水样等未知菌量样本,需要提供至少1L的水样或寄送装有过滤定量水样的滤膜(4°C),干燥寄送!
3.待测样品为RNA样品及cDNA样本,接收后需先进行质检,质检合格的开展后续项目。
4.客户需要提供检测基因的序列和引物序列,若基因序列来自文献等其他途径,可以多参考几组,避免引物特异性不足,延长实验周期。
5.不接受具有致病性的样品。
需要提供
1. 待测样品(原始样品或者RNA或者cDNA,原始样品可由我们代处理,RNA样品及cDNA样本接收后需先进行质检,质检合格的开展后续项目);
2. 提供所需的引物/标准品(也可由平台代设计及合成);
3. 其他所涉及的细胞、试剂盒以及生物耗材等平台都可以有偿提供。
1、内参基因如何选择?
1. 建议选取2-3种内参基因,每种内参基因有2对引物进行上机实测;
2. 内参的反应条件要尽量向目的基因看齐,以确保目的基因的扩增效率。
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