生物扫描电镜主要利用二次电子成像拍摄材料的表面三维形貌情况,拍摄照片为黑白照片;一般用来观察细胞外表面的变形以及受损情况等,也可以观察材料在细胞表面的分布情况,广泛应用于检测生物样品、非均相有机材料、无机材料等微米、纳米范围内的表面特征。
①细胞类
106以上的细胞,用细胞刮刀刮下来,1500-3000转离心,5-10min,收集细胞于1.5ml或2ml离心管,管底肉眼可见2-3粒大米状样品,如果细胞量很多,把细胞团块用细针尖挑成几个小团块,弃上清,沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液,固定液完全浸没样品,可放置于4°C保存。
②组织类
新鲜取材,取材位置准确,组织大小尽量在1-2mm³,离体取材后请尽快投入4℃预冷的固定液中,固定液完全浸没组织,可放置于4°C保存。
③细菌类
吸取OD0.5-0.8的培养物,离心后弃培养基,收集菌体沉淀于管底黄豆大小,可以用PBS洗1-2次,齐上清,沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液,固定液完全浸没样品,可放置于4°C保存。
1. 为什么要加固定液?
固定液是为了保持细胞、组织的固有形态和结构。
2.2.5%戊二醛固定液如何配置?
市售25%戊二醛水溶液 10ml
0.2M磷酸盐缓冲液(pH7.0 50ml
蒸馏水加至 100ml
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