冷冻透射电镜(Cryo-TEM)是基于超低温冷冻制样寄传输技术,将样品冷却到液氮温度(77K),用于观测蛋白、生物切片等对温度敏感的样品;通过对样品的冷冻,可以降低电子束对样品的损伤,减小样品的形变,从而得到更加真实的样品形貌。
1. 不限于生物样品,可测电子束敏感材料样品,但高分辨图像出图比较困难(和材料电镜相比)。
2. 样品一般是水溶液样品,体积200微升,要求浓度比常温测试大100-1000倍。
3. 有机溶剂的含量不超5%,水溶外的其他溶剂请联系负责老师。
4. 不测挥发有毒有磁性放射性样品。
5. 粉末要求5-10mg,分散剂默认是水,粉末粒度不超1um。
6. 薄膜或块状样品不能直接拍摄,需另行制样(如离子减薄、包埋切片、FIB等)。
1. 冷冻透射电镜(Cryo-TEM)的基本原理是什么?
Cryo-TEM通过将生物样品在液态乙烷中快速冷冻至玻璃态(-196°C),保持其天然结构并固定于薄冰层中,利用透射电镜的电子束穿透样品成像,通过探测散射电子信号重构高分辨率二维投影或三维结构,尤其适用于解析生物大分子、细胞器及病毒等低温下的近生理状态结构。
2. Cryo-TEM相比常温TEM的优势是什么?
其主要优势是避免常温样品的脱水损伤和电子束辐照损伤,通过冷冻技术抑制冰晶形成、减少结构塌陷,显著提高对辐照敏感生物样品的保存完整性,从而获得更接近生理状态的高分辨率结构信息,尤其适用于蛋白质复合体、膜蛋白等难结晶样品的结构解析。
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